輝瑞/BioNTech在新冠mRNA疫苗的生產過程中使用到HEPES，同時審評報告反復強調了該輔料的無RNase的關鍵屬性。

結合2016年BioNTech發(fā)表LPX-mRNA制劑的文章中mRNA原液中所采用的buffer為HEPES，基本可以推斷BioNTech采用HEPES作為原液中的buffer且已獲批上市的疫苗原液采用HEPES作為緩沖對。

英國帝國理工大學醫(yī)學院傳染病系系主任Robin Shattock是mRNA預防性疫苗領域的專家，與BioNTech以及PNI等公司都有較為密切的合作。其團隊2021年發(fā)表關于saRNA體外轉錄體系優(yōu)化的文章中，考察篩選了影響saRNA體外轉錄的關鍵影響因素，最終確定了采用40mM濃度的HEPES作為IVT反應體系buffer，具有更優(yōu)的體外轉錄效果。

四、使用HEPES緩沖體系時的注意事項

1、由于pai嗪基團的存在，當HEPES暴露于光線中時，會產生H2O2，這對培養(yǎng)的細胞或其它有生物活性的物體產生毒性，同時對氧化還原敏感的物質不宜共同使用，因此HEPES作為緩沖液的操作應盡量在避光條件下進行。

2、HEPES在生化領域常見的使用濃度為10-25mM，當濃度低于10mM時緩沖能力較弱，不能起到較好的緩沖效果，當濃度較高時對一些細胞可能具有毒害作用。

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